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定量PCR儀的應(yīng)用

更新時間:2014-02-18瀏覽:3813次

實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡稱Real Time PCR)是在定性PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù)。
實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied biosystems公司推出,在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,使每一個循環(huán)變得“可見”,后通過Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線對樣品中的DNA(orcDNA)的起始濃度進(jìn)行定量的方法。
實(shí)時熒光定量PCR是目前確定樣品中DNA(或cDNA)拷貝數(shù)敏感、準(zhǔn)確的方法。如果用于RNA檢測,這被稱為逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時PCR即(Real-time RT-PCR)是實(shí)時PCR法,它是指對DNA或經(jīng)過反轉(zhuǎn)入(RT-PCR)的RNA通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)并實(shí)時監(jiān)測DNA的放大過程,在擴(kuò)增的指數(shù)增長期就測量擴(kuò)增產(chǎn)物,因?yàn)閿U(kuò)增指數(shù)增長期測量值與特異DNA(RNA)起始量存在相關(guān)性,從而實(shí)現(xiàn)定量檢測。RealTime PCR的基本目標(biāo)是測量和鑒別非常微量的特異性核酸,從而可通過監(jiān)測CT值而實(shí)現(xiàn)對原始目標(biāo)基因的含量定量。實(shí)時熒光定量PCR法大的優(yōu)點(diǎn)是克服了終點(diǎn)PCR法進(jìn)入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差,實(shí)現(xiàn)DNA/RNA的定量。該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了對DNA/RNA模板的定量,而且具有靈敏度和特異性高、能實(shí)現(xiàn)多重反應(yīng)、自動化程度高、無污染、實(shí)時和準(zhǔn)確等特點(diǎn),該技術(shù)在醫(yī)學(xué)臨床檢驗(yàn)及臨床醫(yī)學(xué)研究方面有著重要的意義。

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