1、信號的產(chǎn)生、轉換和傳輸

 

   在壓力作用下，鞘液管中的鞘液被持續(xù)不斷地壓入流動室，形成一股穩(wěn)定地連續(xù)的液流，保證了樣本液穩(wěn)定地處于鞘液液流的軸線上，并以單個細胞形式直線通過激光照射區(qū)。激光照射區(qū)又稱測量區(qū)，是指液流與激光束垂直相交的點。當細胞攜帶熒光素標記物通過激光照射區(qū)時，產(chǎn)生代表細胞內部不同物質、不同波長的熒光信號，這些信號以細胞為中心，向空間360。立體角發(fā)射，產(chǎn)生散射光和熒光信號。散射光不依賴任何細胞樣品的制備技術，因此被稱為細胞的物理參數(shù)或固有參數(shù)。散射光又包括前向角散射和測向角散射。前向角散射與被測細胞直徑的平方密切相關，測向角散射光對細胞膜、胞質、核膜的折射率更敏感，可提供有關細胞內精細結構和顆粒性質的信息。熒光信號也有二種；一種是細胞自身在激光照射下發(fā)出的微弱熒光信號，另一種是經(jīng)過特異熒光素標記后的細胞受激發(fā)照射后得到的熒光信號。在免疫分析中常要同時探測兩種以上波長的熒光信號，就采用二向色性反射鏡，或二向色性分光器，來有效地將各種熒光分開。

 

   經(jīng)熒光染色的細胞受到適合的光激發(fā)后產(chǎn)生的熒光是通過光電轉換器轉變成電信號而進行測量的。常用的光電轉換器是光電倍增管(PMT)。從PMT輸出的電信號需要經(jīng)過放大后才能輸入分析儀器。流式細胞儀中一般備有兩類放大器。一類是線性放大器，其輸出信號與輸入信號成線性關系。線性放大器適用于在較小范圍內變化的信號以及代表生物學線性過程的信號，如DNA測量等。另一類是對數(shù)放大器，其輸出信號和輸入信號之間成常用對數(shù)關系。在免疫學測量中常使用對數(shù)放大器。

 

   放大后的電信號被傳送到計算機，再經(jīng)模一數(shù)轉換器傳輸?shù)轿C處理器形成數(shù)據(jù)文件，保存在計算機上。保存在計算機上的數(shù)據(jù)可在脫機后再進行數(shù)據(jù)處理和分析。

 

2、流式細胞儀分選原理

 

   并不是所有的流式細胞儀都具有分選功能。流式細胞儀的分選功能是由細胞分選器來完成的。由噴嘴射出的液流柱在電信號作用下發(fā)生振動，斷裂形成均勻的小液滴。根據(jù)選定的某個參數(shù)由邏輯電路判明是否將被分選，而后由充電電路對選定細胞液滴充電，帶電液滴攜帶細胞通過靜電場而發(fā)生偏轉，落入收集器中。使用不同孔徑的噴孔及改變液流速度，可能會改變分選效果。從參數(shù)測定經(jīng)邏輯選擇再到脈沖充電需要一段延遲時間。測定延遲時間是決定分選質量的關鍵，可根據(jù)具體要求進行適當調整。

 

3、數(shù)據(jù)的顯示和分析數(shù)據(jù)處理

 

   主要包括數(shù)據(jù)的顯示和分析。單參數(shù)直方圖是使用多的圖形顯示形式，既可用于定性分析，又可用于定量分析。單參數(shù)直方圖是由x、Y二方向組成的二維平面圖。橫座標x是所測的熒光或散射光的強度，用“道數(shù)”(Channel No．)來表示。選擇的放大器類型不同，標度不同。縱座標Y通常表示被測細胞的數(shù)目。正常情況下，數(shù)據(jù)分析得到的圖形為具有一個或若干個峰的曲線圖。對曲線圖的解釋應該具體問題具體分析。

 

   除直方圖外，數(shù)據(jù)顯示方式還包括二維點圖、二維等高圖、假三維圖和列表模式等。二維點圖也是比較常用的數(shù)據(jù)顯示類型。它顯示兩個獨立參數(shù)與細胞相對數(shù)之間的關系，也是二維平面圖，橫縱坐標可以根據(jù)自己選定的被測參數(shù)自行決定，點的位置表明了細胞和顆粒具有的二個被測參數(shù)的數(shù)值。二維點圖所提供的信息量要大于單參數(shù)直方圖。

 

   數(shù)據(jù)分析的方法大體可分為參數(shù)法和非參數(shù)法兩大類。當被檢測的生物學系統(tǒng)能夠用某種數(shù)學模型時則多使用參數(shù)方法。非參數(shù)分析法不用對顯示的圖像做任何假設，也不采用數(shù)學模型，分析程序可以很簡單．也可能很復雜。